Pewarnaan Gram memilahkan bakteri menjadi 2 kelompk, yaitu bakteri Gram Positif dan Gram Negatif. Bakteri Gram Positif berwarna ungu yang disebabkan oleh kompleks warna cristal violet tetap dipertahankan meskipun diberi larutan pemucat. Sedangkan bakteri Gram Negatif berwarna merah karena kompleks warna tersebut larut sewaktu pemberian larutan pemucat dan kemudian mengambil zat warna kedua yang berwarna merah.
Perbedaan hasil dalam pewarnaan tersebut disebabkan perbedaan struktur, terutama dinding sel kedua kelompok bakteri tersebut.
Penyebab perebdaan pewarnaan Gram dimungkinkan karena komposisi dinding sel bakteri gram positif berbeda dengan bakteri gram negatif. Dinding sel yang lebih tebal pada bakteri gram positif menyusut oleh perlakuan alkohol karena terjadi dehidrasi, menyebabkan pori-pori dinding sel menutup sehingga mencegah larutannya kompleks zat warna ungu (cristal violet) pada langkah pemucatan. Sedangkan bakteri gram negatif memiliki kandungan lipid yang lebih tinggi pada dinding sel; dan lipid tersebut dapat larut dalam alkohol.
untuk lebih jelasnya berikut saya sajikan langkah-langkah pewarnaan bakteri yang dilakukan oleh analis mikrobiologi BPPMHP Makassar:
Bahan dan Alat:
- Gelas preparat
- jarum ose
- biakan bakteri (umur 24 jam)
- larutan cristal violet
- larutan iodine
- larutan safranin
- aquadest
- alkohol
- spidol
- tissue (kertas hisap)
- mikroskope
- botol pijit (air mengalir)
Cara Kerja:
Buat preparat ulas dari bakteri (ambil dari TSA slant) di atas kaca preparat. Usahakan ulasan setipis mungkin. Fiksasi gelas preparat dengan cara dilewatkan di atas api (bunzen).
Warnai ulasan dengan memberi larutan cristal violet selama 1 menit, miringkan kaca preparat untuk membuang kelebihan larutan lalu cuci sebentar dengan air mengalir.
Tiriskan gelas preparat dengan memiringkan sisi-sisi yang sempit di atas kertas serap (tissue).
Beri larutan iodine selama 1 menit. cuci dengan air mengalir, miringkan kaca preparat untuk membuang kelebihan larutan lalu cuci sebentar dengan air mengalir.
Lakukan dekolorasi dengan alkohol 96%, tetes demi tetes selama 30 detik, atau hingga zat warna kristal violet tidak nampak lagi mengalir dari gelas preparat. Cuci kembali dengan air mengalir dan tiriskan.
Beri larutan safranin selama 1 menit dan cuci kembali dengan air mengalir.
Tiriskan gelas preparat, keringkan dan periksa di bawah mikroskop.
Bakteri Gram Negatif (Salmaonella) berbentuk batang
Source:
- SNI 01-2332.2-2006. Penentuan Salmonella pada Produk Perikanan
- LUD Waluyo.2008. Teknik & Metode Dasar dalam Mikrobiologi
